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標題: 不同免疫增強劑對蛋雞新城疫疫苗免疫效果影響試驗 [打印本頁]

作者: 哈中活菌    時間: 2013-5-21 14:05
標題: 不同免疫增強劑對蛋雞新城疫疫苗免疫效果影響試驗
免疫調節劑是用于調節和控制免疫功能的藥物,包括免疫抑制劑和免疫增強劑。免疫增強劑是一類單獨使用或與抗原同時使用、通過非特異性途徑增強機體免疫應答的物質,可增強機體的
免疫功能,緩解由環境造成的免疫功能紊亂,有利于預防和治療傳染性和條件性疾病。目前在臨床上常用的免疫增強劑有黃芪多糖、卡介苗、鹽酸左旋咪唑、香菇多糖、VC、VE、硒、白細胞介素-2(白介素-2)等。本試驗選用黃芪多糖粉劑、鹽酸左旋咪唑、VE、VC作為免疫增強劑,以探明不同免疫增強劑對蛋雞新城疫免疫效果的影響。
1 材料與方法
1.1 試驗動物
    1 日齡健康海蘭褐蛋雞,購于泰安東岳種禽有限公司。
1.2 試驗材料
    96 孔V 型微量反應板、移液器、生理鹽水、1%雞紅細胞懸液。
    新城疫血凝抑制試驗抗原由中國科學院提供;雞新城疫滅活疫苗(La Sota 株)購于乾元浩生物股份有限公司。
    黃芪多糖粉劑、鹽酸左旋咪唑、VE、VC由ACV健康養殖工程中心提供。
    RPMI 1640 培養液(Gibco 公司);CKK-8、刀豆蛋白A(ConA,Sigma公司)。
    小牛血清、Hank′s液、臺酚蘭、肝素鈉。
1.3 試驗動物的處理
    600 只健康海蘭褐蛋雞隨機分為A、B、C、D、E 5 組,每組120 只。試驗在相同的環境下,采用同種飼料進行飼喂和同一防疫程序進行免疫預防。50 日齡防疫新城疫Ⅳ系和新城疫滅活疫苗時,免疫增強劑在防疫前后(48~52 日齡)連用5 d。A 組使用預防量的黃芪多糖粉劑,B 組鹽酸左旋咪唑10 mg/kg 拌料,每天早晚各一次,C 組VE 80 mg/kg 拌料,D 組VC 100 mg/kg 拌料,E 組不加免疫增強劑,作為對照組。
1.4 抗體水平檢測
    分別于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天,每組隨機抽樣15 只雞翅靜脈采血,分離血清,采用血凝(HA)與血凝抑制試驗(HI)(《高致病性禽流感診斷技術》中華人民共和國國家標準GB/T 18936-2003)檢測抗體效價,計算每組平均值,結果以log2表示。
1.5 ConA誘導的雞血液T淋巴細胞轉化試驗
    分別于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天,每組隨機抽取15 只雞翅靜脈采取抗凝血,將1.5 mL 抗凝血與1.5 mL 細胞培養液(1640,不含胎牛血清)混勻;在滅菌離心管中加入3 mL 淋巴細胞分離液,并將3 mL 混勻血液輕輕的平鋪在淋巴細胞分離液表面,1 500 r/min 離心20 min;將離心分層的淋巴細胞吸出,轉到1.5 mL 離心管中,加入細胞培養液(1640,不含胎牛血清)重懸,3 000 r/min 洗滌兩次;將淋巴細胞懸浮于1640 細胞培養液中,用臺酚蘭染色計數活細胞數(應在95%以上),調整細胞濃度為1×107個/mL。將調整好的細胞懸液加入96 孔細胞培養板,每孔加99 μL,然后實驗組加入1 μL ConA(終濃度為10 μg/mL),對照組加入1 μL 細胞培養液(1640,含胎牛血清),空白對照加入100 μL 細胞培養液(1640,含胎牛血清)。每個樣品作兩個平行。將鋪好的96 孔細胞培養板放入5%CO2,37 ℃培養箱中培養48 h;每孔加入終濃度10 μL CCK-8,放入二氧化碳培養箱,孵育1 h 后用酶標儀(OD450)讀數,并計算刺激值。






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