丁酸梭菌活菌制劑對腸道菌群影響的研究

　　中國微生態(tài)學雜志1999年第11卷第6期

　　趙熙　冉陸　楊寶蘭　姚景會　付萍　陳稚峰　李志剛

　　摘要　通過動物實驗和人體試食試驗，對丁酸梭菌活菌制劑一泰平片對腸道菌群的影響進行了研究。結果表明：受試對象腸道內的雙歧桿菌的數(shù)量增加，差異有極顯著性(p≤0.01)，乳桿菌的數(shù)量增加，差異有顯著性(p≤0.05)。說明丁酸梭菌活菌制劑一泰平片具有一定的增殖腸道內有益菌和抑制有害菌的作用。

　　關鍵詞：丁酸梭菌　腸道菌群

　　丁酸梭菌(Clostridium butyricum)是1933年由日本的宮入近治博士首先發(fā)現(xiàn)并報告的。其活菌制劑作為整腸劑在日本使用已有50年。我們對丁酸梭菌活菌制劑一泰平片對小鼠及人的腸道菌群的影響進行了實驗研究。

　　1　材料與方法

　　1.1　樣品　由深圳醫(yī)藥保健品進出口有限公司金華分公司提供的泰平片，經測定每片含丁酸梭菌活菌數(shù)為0.4×105CFU/g。

　　1.2　實驗動物　由中國藥品生物制品檢定所實驗動物中心提供的健康成年雄性BALB/c小鼠40只(批準號：京動管制字1994經081號)，體重18g～22g。

　　1.3　受試人群　1個月內未患過胃腸疾病、未服用過抗生素類藥物、未服用過微生態(tài)制劑;血液、尿、便常規(guī)檢查及肝功能檢查，心率、血壓、心電圖、B超(肝、膽、脾、腎)檢查，指標全部正常的30名志愿者，年齡25歲～60歲，男女各半。

　　1.4　實驗方法

　　1.4.1　樣品中丁酸梭菌活菌計數(shù)　無菌稱取25g樣品，加入225ml無菌生理鹽水中混勻，10倍稀釋。選擇合適的稀釋度，接種于TPY培養(yǎng)基。37℃48h～78h，厭氧培養(yǎng)，計數(shù)丁酸梭菌。

　　1.4.2　腸道菌群檢驗方法　雙歧桿菌：BBL培養(yǎng)基，37℃48h～72h厭氧培養(yǎng);乳桿菌：LBs培養(yǎng)基，37℃48h培養(yǎng);腸桿菌：EMB培養(yǎng)基，37℃24h培養(yǎng);腸球菌：疊氮鈉-結晶紫-七葉苷培養(yǎng)基，37℃24h培養(yǎng);擬桿菌：Bd培養(yǎng)基，37℃48h厭氧培養(yǎng);產氣莢膜梭菌：TSC培養(yǎng)基，37℃24h厭氧培養(yǎng);丁酸梭菌：TPY培養(yǎng)基，37℃48h厭氧培養(yǎng)。樣品稀釋液：自制。

　　1.4.3　動物試驗　泰平片人體推薦量為每人每日3片，即每人0.9g/60kg·b.w,相當于0.015g/kg·b.w，小鼠等效劑量為人體推薦量的10倍，即每日0.15kg·b.w(中劑量)，上、下各設一個劑量組：0.45g/kg·b.w(高劑量)和0.075g/kg·b.w(低劑量)。選用40只雄性小鼠隨機分成4組，每組10只，其中1組為正常對照組，對滅菌稀釋液灌胃，灌胃量按0.2ml/10g·b.w計算，其余3組以泰平片混懸液灌胃，每日1次，連續(xù)7天，于給受試物最后一次24h后，無菌采取小鼠糞便0.1g～0.4g，置已稱重的帶玻璃珠的干燥滅菌小試管中，再稱重，計算出小鼠糞便重量，并加滅菌稀釋液，稀釋10倍，振蕩1分鐘，再依次10倍系列稀釋，選擇合適的稀釋度，分別接種在各選擇性培養(yǎng)基上。

　　1.4.4　人體試食試驗　實驗采用自身對照。試食受試物前，收集受試者新鮮糞便于便盒中，立即送檢。定量稱取標本，10倍稀釋并勻漿后，分別接種至各選擇性培養(yǎng)基，檢驗腸道菌群。受試者每日服用泰平片3片(每片重0.3g，相當于每日服用丁酸梭菌1.2×105CFU)，連續(xù)10d。于給受試物最后一次24h后，再收集受試者新鮮糞便，檢驗腸道菌群。

　　2　結　果

　　2.1　泰平片中丁酸梭菌活菌計數(shù)結果見表1。

　　表1　泰平片中丁酸梭菌活菌計數(shù)(接種量為0.1ml)


[align=left] [/align]
　　由表1可知，泰平片含丁酸梭菌活菌數(shù)為1.2×105CFU/g。

　　2.2　泰平片對BALB/c小鼠體重的影響見表2。

　　表2　試驗前后各組小鼠的體重及增長值


　　由表2可知，經統(tǒng)計學處理，小鼠的初始體重在低、中、高劑量組和對照組間比較，差異無顯著性(p≥0.05)。經口給予小鼠不同劑量的受試物7天后，小鼠的體重增長值在低、中、高劑量組和對照組間比較，差異無顯著性(p≥0.05)，即泰平片對小鼠的體重增長無影響。

　　2.3　泰平片對BALB/c小鼠腸道菌群調節(jié)的作用結果見表3。

　　表3　泰平片對小鼠腸道菌群的影響(logcfu,x±SD,n=10)


　　*與灌服受試物前比較(自身對照)　p≤0.05　△與正常對照組(灌服稀釋液后)比較p≤0.05

　　**與灌服受試物前比較(自身對照)　p≤0.01　△△與正常對照組(灌服稀釋液后)比較p≤0.01　　由表3可知，正常對照組灌服樣品稀釋液前后，小鼠腸道菌群數(shù)量無明顯變化，差異無顯著性(p≥0.05)。經口給予小鼠受試物后，小鼠腸道內的腸桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量發(fā)生改變。低劑量組與灌服受試物前比較，乳桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01);中劑量組與灌服受試物前比較，乳桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01)，高劑量組與灌服受試物前比較，雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01)。

　　低劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有顯著性(p≤0.05);中劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有顯著性(p≤0.05)，乳桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01);高劑量組與正常對照組比較，雙歧桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01)，乳桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有顯著性(p≤0.01)。

　　2.4　泰平片對人體腸道菌群調節(jié)的作用結果見表4。

　　表4　泰平片對人體腸道菌群的影響(logcfu,x±SD，n=30)


　　*服用受試物后與服用受試物前比較　p≤0.05，**服用受試物后與服用受試物前比較 p≤0.01　　由表4可知，受試人群服用泰平片，腸球菌、腸桿菌、產氣莢膜梭菌的數(shù)量差異無顯著性(p≥0.05)，雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌的數(shù)量明顯增加，差異有極顯著性(p≤0.01)。服用前，取糞便標本10-2稀釋液0.1mL接種于TPY培養(yǎng)基，均未檢出丁酸梭菌，服用后，全部糞便標本均檢出丁酸梭菌。說明受試人群腸道內菌群發(fā)生了有益的變化。

　　2.4　受試者自覺癥狀觀察　服用泰平片后，部分受試者有排氣增多的現(xiàn)象，部分受試者的排便狀況有所改善，未見有不良反應。

　　3　討　論

　　丁酸梭菌是革蘭陽性厭氧芽孢菌，在人體腸道內是非常住菌，其芽孢對外界不利因素的抵抗力較強，由丁酸梭菌芽孢制成的微生態(tài)制劑耐貯存。日本對丁酸梭菌的生物學特性、生理功能做過大量的研究。將其作為微生態(tài)調節(jié)劑使用已有50年。泰平片是含有丁酸梭菌活菌的微生態(tài)制劑，給小鼠灌服后，腸道內雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量明顯增加。同樣在人體試食試驗中，每日服用3片泰平片后，腸道菌群發(fā)生了有益的變化：糞便中的有益菌雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量明顯增加，腸球菌、腸桿菌以及有害菌產氣莢膜梭菌的數(shù)量無明顯變化。

　　作者單位:趙熙　冉陸　楊寶蘭　姚景會　付萍　陳稚峰　李志剛　衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所　北京　100021