動物性飼料體外蛋白質消化率測定的關鍵控制點

gengqing3329

  以下是本人在網上找到的一篇文章，可是這篇文章中直說樣品放在搖床上，可是搖得速度或震蕩的速度是多少？我以前也在化驗室室做過這方面的很多試驗，可是不同的速度會有不同的結果！請問速度到底是多呢？

動物性飼料體外蛋白質消化率測定的關鍵控制點


隨著我國養殖業和飼料工業的迅速發展，常規蛋白質飼料資源如魚粉、豆粕等越來越短缺，飼料原料的質量很不穩定，摻假、使雜現象嚴重。副產品如羽毛粉、血球粉等由于采用的加工工藝不同，盡管蛋白質含量很高（70%~80%，甚至高達90％），但其消化率變動范圍很大。我們實驗室近3年共對近百個魚粉、肉粉、肉骨粉和羽毛粉樣品進行了體外消化率的測定，魚粉和肉骨粉的結果范圍為63.2%～96.8％，羽毛粉為20.2%～78.3％。盡管優質純魚粉的消化率達90％以上，但摻入羽毛粉、血粉等后，魚粉從常規分析蛋白質含量夠，但使其消化率大大下降，有的僅60％左右，因此，評定動物性飼料的營養價值，除了常規分析指標粗蛋白、鈣和磷等，其消化率是一個很重要的評價指標。
    通過動物試驗評定飼料營養價值費時費力，成本較高。目前我國已經頒布的GB/T17811-1999《動物蛋白質飼料消化率的測定 胃蛋白酶法》，是相對于動物性試驗的簡便、快速評價方法。但在使用這一方法時，由于對方法的理解和掌握不夠，導致不同實驗室間的測定結果差異很大。現將測定過程中的關鍵控制點介紹如下。
1 方法的適用范圍
    該方法僅適合于動物性蛋白質飼料，如魚粉、肉骨粉、羽毛粉、酵母粉、血粉等體外消化率測定。該方法不適合用于植物蛋白質飼料原料（如豆粕、菜籽粕、棉籽粕及其它雜粕）或配合飼料，因為它們中存在的復雜碳水化合物如纖維性物質及淀粉等會干擾胃蛋白酶對蛋白質的消化。
2 樣品選取和制備
    選取有代表性的樣品，粉碎并全部過20目篩（孔徑0.9 mm）。注意事項：①不能過細，也不能過粗。因為樣品的粉碎粒度直接影響消化率的高低，粉碎過細，單位質量樣品的接觸面積增加，會導致消化率結果偏高；反之，則會導致結果偏低。②不能只取篩下物去做分析測定，因為篩下物的樣品不能完全代表待檢樣品。因此要讓樣品全部通過20目篩，混勻后再進行測定。
3 試劑和溶液配制
3.1 2g/l胃蛋白酶溶液的配制
    ①移取6.1ml濃鹽酸，加蒸餾水稀釋至1 000ml；②將上述稀鹽酸加熱升溫至42～45℃，取下，然后加入2g活性為1：10 000生化級胃蛋白酶，輕輕地攪動，使其溶解。
3.2 注意事項
    ①所用的胃蛋白酶必須為生化級，如果有條件的，最好對其活性進行實測。如果其活性為1：3 000或其它規格，應按照活性比例，相應增加或減少酶的用量，使胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的活性為20IU/ml。因為胃蛋白酶溶液中酶活性的高低直接影響消化率的高低。如果與標準偏離，測定結果將無可比性，失去參考價值。②溶液一定要現用現配，避免配制時過熱，注意勿在加熱板或電爐上直接加熱胃蛋白酶溶液，否則會使沉于燒杯底部的酶直接局部過熱而失活。
4 測定步驟及注意事項
4.1 測定步驟
    稱取試樣1g（精確至0.000 1ｇ）于300ml具塞三角瓶中，準確加入42～45℃的2g/l胃蛋白酶溶液150ml，加塞，置于搖床，45℃條件下消化16h。消化后殘渣用濾紙過濾，并用蒸餾水洗凈濾紙上的未消化殘渣，然后將未消化殘渣連同濾紙一起轉入凱氏消化管，按照凱氏定氮方法測定粗蛋白質含量。同時測定樣品中粗蛋白。根據樣品中粗蛋白含量與未消化殘渣中粗蛋白質含量之差與樣品中粗蛋白含量的比值計算得出體外消化率的結果。
4.2 注意事項
    ①如果樣品的脂肪含量達1%~10％，最好脫脂；含脂肪大于10％，則必須脫脂，否則脂肪會影響測定結果。另外，脫脂后的樣品需干燥后再稱樣測定。②胃蛋白酶的活性高低與溫度有密切關系，42～45℃條件下活性較高。如果溫度過高會使酶失去活性；反之，會使酶的活性降低。因此，消化用的搖床或烘箱的溫度一定要控制準確，最好經過溫度校準。③在pH值和溫度一定的條件下，消化時間的長短是影響消化率的一個關鍵因素。消化時間越長，消化率越高；反之，消化率越低。為了使所獲得的數據結果具有良好的可比性，要嚴格控制消化時間。④如果基層實驗室沒有恒溫平轉搖床，也可在45℃恒溫烘箱中進行消化，但消化的最初4h，每0.5h搖動1次；4～8h，每1h搖1次。

    我們選取了2個魚粉和1個羽毛粉樣品，對在烘箱和搖床上的測定進行了比較試驗，結果見表1。從表1結果可以看出，同一樣品在搖床和烘箱中進行消化測定結果無顯著差異，烘箱中測定結果略低于恒溫平轉搖床上的測定結果。
5 結果及判斷
    如果嚴格掌握好以上實驗條件，就可以獲得準確且具有良好重現性的結果見表2。
一般來講，魚粉的消化率應不低于85％，優質魚粉應該在90％以上，而飼用羽毛粉的消化率應不低于75％。

參考文獻
1 GB/T17811-1999 動物蛋白質飼料消化率的測定.胃蛋白酶法
2 Journal of Association of Official Analytist Chemists, 1971, 54:669

trssjc

不錯的資料，我們正想開展這方面的檢測。