復方丹參注射液與鹽酸甜菜堿抗心肌缺氧的實驗研究

wlei908

【摘要】  目的 觀察復方丹參注射液與鹽酸甜菜堿合用對心肌缺氧小鼠耐缺氧作用的影響，并比較兩藥單用的效果，為研究新藥提供實驗依據。方法 采用腹腔注射異丙腎上腺素造成心肌耗氧量增加小鼠模型，記錄不同時間點的累計耗氧量和小鼠的存活時間。結果 復方丹參注射液與鹽酸甜菜堿合用組5、10 min小鼠累計耗氧量明顯降低，且存活時間延長，與單用藥物組相比，差別有統計學意義；丹參注射液組與鹽酸甜菜堿組相比，差別無統計學意義。結論 復方丹參注射液與鹽酸甜菜堿聯用對改善心肌缺氧效果顯著，療效優于單用組。

【關鍵詞】  復方丹參注射液 鹽酸甜菜堿 心肌缺氧

　　The anti?myocardial hypoxic effects of compound solvia miltiorrhiza injection and betaine hydrochloride

　　CHEN Mei?hua， WU Yue?peng， CHEN Wei， MENG Qiang， GAO Yun?sheng

　　（School of Pharmacy, Taishan Medical College，Taian 271000，China;Affiliated Hospital of Taishan Medical College, Taian 271000，China；Pharmaceutical Undergraduate of 2003 Grade, Taishan Medical College，Taian 271000，China）

　　Abstract： Objective： To study the effect of tolerance hypoxia of hypoxic cardiomyocyte mice by combined application of compound solvia miltiorrhiza injection and betaine hydrochloride, to compare the effect of the two drugs with that used alone, and to establish a laboratory foundation in developing new drugs.  Methods: Mice models of myocardium anoxia increase were induced by injected isoprenaline. Then put mice into the obturated vases and record the accumulative oxygen consumption of different time and the survival time of mice. Rusults：Compared with that in mice received compound solvia miltiorrhiza injection or betaine hydrochloride alone, the accumulative oxygen consumption of 5 and 10 minutes were reduced obviously and the survivial time were prolonged in mice received compound solvia miltiorrhiza injection and betaine hydrochloride. There were no significant difference between compound solvia miltiorrhiza injection group and betaine hydrochloride group. Conclusion：Compound application of compound solvia miltiorrhiza injection and betaine hydrochloride has a notable result in anti?hypoxic cardiomyocyte, moreover the effects are better than the single drug.
   
　　Key words: compound solvia miltiorrhiza injection;  betaine hydrochloride; hypoxic cardiomyocyte

　　丹參是一種主治心血管系統疾病的常用中藥，中醫理論認為丹參具有祛瘀止痛、清心除煩的作用。復方丹參注射液(compound solvia miltiorrhiza injection)是由丹參和降香經過先進的工藝提取制成，主要成分為原兒茶醛及原兒茶酸。復方丹參注射液在治療冠心病方面有肯定的療效，通過擴張冠狀動脈，增加心肌供血供氧，也通過鈣拮抗和抗氧化作用減輕心肌損傷，還用于治療高血壓和其他老年心腦血管疾病［1］。甜菜堿(betaine)化學名為三甲銨乙內酯，屬季銨型生物堿，是廣泛存在于動植物體內的天然維生素物質，40年代初，研究人員發現甜菜堿對動物體內的甲基代謝有顯著的營養調控作用，甜菜堿作為甲基供體，與膽堿、蛋氨酸共同參與生化反應，參與蛋白質的合成。鹽酸甜菜堿可用于治療胃酸缺乏、動脈粥樣硬化及肝臟疾病等，并具有擴張血管、降低外周血管阻力、降壓、抗脂肪肝和抗腫瘤等多種藥理作用［2］。實驗證明，鹽酸甜菜堿(betaine hydrochloride,BTH)可增強心肌耗氧量增加小鼠的耐缺氧能力。本實驗通過腹腔注射異丙腎上腺素造成小鼠心肌耗氧量增加，觀察不同時間點的累計耗氧量及小鼠的存活時間，比較復方丹參注射液組、鹽酸甜菜堿組和二者聯用組耗氧量及存活時間有無差別，為發現甜菜堿的藥用價值和研究開發心血管藥物提供實驗依據。

　　1  材料和方法

　　1.1  實驗材料

　　1.1.1  藥品及試劑  復方丹參注射液（上海通用藥業股份有限公司，批號：041130）；鹽酸甜菜堿由泰山醫學院藥學院合成，配制成2%溶液供實驗用；0.05%鹽酸異丙腎上腺素注射液（ISO，上海禾豐制藥有限公司，批號：030706）；0.9%氯化鈉注射液（NS，山東省泰安制藥廠，批號：05020202）。

　　1.1.2  實驗動物  昆明種小鼠（清潔型），體重18～22 g，由泰山醫學院實驗動物中心提供。

　　1.1.3  儀器  小鼠耗氧量動態變化測定裝置，泰山醫學院藥學院制備。

　　1.2  實驗方法

　　1.2.1  動物分組與給藥方法  將實驗小鼠按性別和體重隨機分為5組：①生理鹽水對照組；②模型對照組；③2%鹽酸甜菜堿組；④復方丹參注射液組；⑤2%鹽酸甜菜堿與復方丹參注射液聯用組。其中，①組小鼠腹腔注射（ip）NS 20 ml/kg，其余四組均ip鹽酸異丙腎上腺素20 mg/kg。10 min后，③組小鼠ip 2%鹽酸甜菜堿20 ml/kg，④組小鼠ip復方丹參注射液20 ml/kg，⑤組小鼠ip 2%鹽酸甜菜堿20 ml/kg和復方丹參注射液20 ml/kg，其余兩組ip NS 20 ml/kg。

　　1.2.2  實驗測定裝置  安裝小鼠耗氧量動態變化測定裝置［3］，調整液面至定量管“0”刻度，備用。

　　1.2.3  實驗觀察方法  小鼠第二次ip后10 min，將小鼠放入盛有鈉石灰的廣口瓶內，使裝置密閉。立刻記錄實驗開始時間，密切觀察小鼠的反應。小鼠吸入O2，呼出CO2，CO2被鈉石灰吸收，裝置內氣體壓力降低，燒杯內的水在定量管內上升。分別觀察和記錄實驗開始后5、10 min時液面上升高度，作為小鼠的累計耗氧量；記錄各鼠從裝置密閉至呼吸停止的時間，為小鼠缺氧存活時間。

　　1.3  統計學處理
   
　　實驗結果以±s表示，統計學處理采用SPSS統計學軟件進行方差分析。

　　2  結果

　　2.1  對心肌耗氧量增加小鼠存活時間的影響
   
　　復方丹參注射液和鹽酸甜菜堿單用組小鼠缺氧存活時間較模型對照組延長，延長率分別為35.54%和27.27%，與模型對照組相比，差異有統計學意義（P<0.05），而單用組二者相比，差別無統計學意義（P>0.05）；聯用組缺氧存活時間與鹽酸甜菜堿組相比，差別有統計學意義（P< 0.05），與等劑量丹參注射液組相比，差別有高度統計學意義（P<0.01）。結果見表1、圖1。
2.2  對心肌耗氧量增加小鼠累計耗氧量的影響
   
　　小鼠放入密閉裝置后5 min、10 min定量管中液面上升的高度為5 min、10 min的累計耗氧量。結果表明，2%鹽酸甜菜堿和復方丹參注射液在20 ml/kg時可降低小鼠5 min、10 min的累計耗氧量，兩藥聯用組耗氧量明顯降低，療效優于單用組（P<0.05）。見表2、圖2。

　　表1  復方丹參注射液和鹽酸甜菜堿對小鼠存活時間的影響（略）

　　注：1. F=7.827  P=0.000；2. a.與NS對照組比較 P<0.05， b.與模型對照組比較 P<0.05，c.與BTH組比較 P<0.05，d.與丹參注射液組比較 P<0.01
　　
　　表2  復方丹參注射液和鹽酸甜菜堿對小鼠累計耗氧量的影響（略）

　　注：1. 5min  F=4.639  P=0.003， 10min  F=4.821  P=0.003；2. a.與NS對照組比較 P<0.05，b.與模型對照組比較 P<0.05，c. 與BTH組比較 P<0.05，d.與丹參注射液組比較 P<0.05

　　圖1  各組小鼠缺氧時間的比較（略）

　　圖2  各組小鼠累計耗氧量的比較（略）

　　3  討論
   
　　丹參在臨床上主治心血管系統疾病，近年來研究顯示，丹參具有清除氧自由基、保護線粒體改善能量代謝、減輕鈣超載調節鈣穩定作用。實驗證明鹽酸甜菜堿可增強心肌缺氧小鼠的耐缺氧作用［5］，故本實驗觀察復方丹參注射液和鹽酸甜菜堿對心肌缺氧小鼠的耐缺氧作用。實驗結果表明，模型對照組5min、10min累計耗氧量分別較正常對照組升高70.95%和56.51%，二者相比差別有統計學意義，說明異丙腎上腺素引起心肌耗氧量增加小鼠模型制備成功。實驗所使用的小鼠耗氧量變化動態測定裝置，可同時觀察小鼠的存活時間、不同時間的累計耗氧量及不同時間段的耗氧量，能夠客觀反映小鼠的耐缺氧能力。結果顯示：復方丹參注射液單用組，小鼠的存活時間較模型對照組延長，5 min、10 min累計耗氧量也較模型對照組降低，證實了復方丹參注射液在改善心肌缺氧方面的作用。提示丹參可通過抗氧化作用保護線粒體、鈣拮抗作用及擴張血管等作用增加心肌供血供氧，也可能通過拮抗兒茶酚胺類遞質降低耗氧量，發揮對心臟的保護作用，藥理實驗和臨床結果是一致的。
        
　　甜菜堿是合成蛋氨酸、肉堿、肌酸、磷脂、腎上腺素等多種具有重要生理功能的物質所必需的，甜菜堿參與甲基化反應，可作為機體內胱氨酸向蛋氨酸轉變的甲基供體，替代蛋氨酸的供甲基效能。研究表明，甜菜堿對呼吸酶具有保護作用，Pollard［6］等觀察到，甜菜堿對牛肝谷氨酸脫氫酶、豬心MDH、豬心谷—草轉氨酶活性有保護作用，推測甜菜堿對缺氧心肌具有保護作用可能是影響三羧酸循環中的某些酶活性實現的，但目前甜菜堿對酶的生理功能保護機制并不清楚，可能是甜菜堿包圍酶形成一層外殼，使酶免于其他因素引起其構象、聚合—解聚等變化［7］。
   
　　本實驗中復方丹參注射液和鹽酸甜菜堿單用組相比，累計耗氧量和存活時間均無差別，說明二者在改善心肌能量代謝方面沒有顯著的藥效差別。而二者聯用組，小鼠缺氧存活時間較單用組延長，5 min、10 min累計耗氧量也較單用組降低，提示兩藥聯用在改善心肌缺氧方面具有協同作用，具體機制尚不清楚。通過我們的實驗，可以推測甜菜堿在改善心肌能量代謝方面有作用，有望開發成為治療心血管疾病的一種新藥，但需要做大量的研究，進一步闡述其抗心肌缺氧的作用機制。

牛莫王

治療五號病心肌炎怎樣？？？

yangxue

甜菜堿的作用還真是廣泛，不知效果是否真的這么好。