發(fā)酵大豆蛋白中小肽的測定

于炳欣

1、原理：
利用三氯醋酸作蛋白質(zhì)沉淀劑，將發(fā)酵大豆蛋白中的蛋白質(zhì)和肽鏈較長的肽沉淀，并將其中的短鏈小肽用酸溶解出來，經(jīng)過濾、離心、消化、蒸餾，測定其蛋白質(zhì)含量，并以其占樣品粗蛋白質(zhì)的百分?jǐn)?shù)來表示含量。本方法是參照中華人民共和國輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)大豆肽粉標(biāo)準(zhǔn)(QB/ T 2653 -2004)基礎(chǔ)上修訂而來。

2、試劑及儀器：
1）100ml燒杯；
2）10ml，50ml移液管；
3）干過濾裝置；
4）半微量法或全量法粗蛋白質(zhì)測定的試劑和裝置；
5）15％三氯醋酸溶液；
6）4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘的離心機(jī)。
3、方法：
準(zhǔn)確稱取樣品6克于100 ml燒杯中,準(zhǔn)確加入15 %三氯乙酸溶液50 毫升，混合均勻，靜置5 分鐘，以中速定性濾紙干過濾，棄去少許初始濾液，將濾液轉(zhuǎn)移至離心管，在4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘下離心10 分鐘，準(zhǔn)確移取其上清液10ml于消化管中，按半微量法（消化后定容至100ml，準(zhǔn)確移取其中10ml進(jìn)行蒸餾）或全量法粗蛋白質(zhì)測定方法測定其粗蛋白質(zhì)含量。同時做空白試驗、測定樣品的粗蛋白質(zhì)的含量。
4、結(jié)果與計算：
小 肽%（半微量法）=（V1－V0）×C×6.25×0.014×10×5÷m×100%÷cp×100%
小 肽%（全量法）=（V1－V0）×C×6.25×0.014×5÷m×100%÷cp×100%
            式中：
V1--餾出液消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ml；
V0--空白試驗消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ml；
C--鹽酸的摩爾濃度，mol/l；
6．25×0．014--蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換系數(shù)；
m--稱取樣品質(zhì)量，ｇ；
cp—樣品的粗蛋白質(zhì)含量，%。
重復(fù)性:   A）、每個試樣的兩個平行樣間允許相對偏差為其算術(shù)平均值的10%，以其算術(shù)平均值上報結(jié)果；              
C）、所得的結(jié)果是指小肽占粗蛋白質(zhì)的百分含量。
因其中含有無機(jī)氮，測得結(jié)果應(yīng)減去無機(jī)氮，見非蛋白氮的測定。

移液管；
3）干過濾裝置；
4）半微量粗蛋白質(zhì)測定試劑和裝置；
5）15％三氯醋酸溶液（TCA溶液）；
6）4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘的離心機(jī)。
三、方法：準(zhǔn)確稱取樣品3克于100 ml燒杯中,加入15 %TCA (三氯乙酸) 溶液25 毫升,混合均勻,靜置5 分鐘。將溶液定量轉(zhuǎn)移,在4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘下離心10 分鐘后,取全部上清液，用干的濾紙過濾，準(zhǔn)確移取其濾液10ml于消化管中，按測定粗蛋質(zhì)方法消化、定容（100 ml）、移取1 0ml消化液蒸餾，測定其粗蛋白質(zhì)含量（半微量定氮法）。同時做空白試驗。
四、結(jié)果：
小肽%（占干基）=｛（V-V0）×C（HCl）×6．25×0．014×2．5（25ml÷10ml）×10（100 ml÷10ml）｝÷m×100%

式中： V---樣品消耗HCl的體積，ml；
V0---空白消耗HCl的體積，ml；
C（HCl）---鹽酸的摩爾濃度，mol/l；
6．25×0．014---蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換系數(shù)。
m---稱取樣品質(zhì)量，ｇ。
小 肽%（占蛋白質(zhì)）=小肽%（占干基）÷粗蛋白質(zhì)%×100

重復(fù)性:   A）、每個試樣取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果；  B）、允許絕對偏差為10%；
C）、以小肽占粗蛋白質(zhì)的百分含量上報結(jié)果。


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