原位PCR技術(shù)

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原位PCR綜合了PCR和原位雜交的優(yōu)點，是一種在組織切片或細(xì)胞涂片上原位對特定的DNA或RNA進(jìn)行擴增，再用特異性探針原位雜交檢測。原位PCR標(biāo)本一般需先經(jīng)化學(xué)固定，以保持組織細(xì)胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)。細(xì)胞膜和核膜有一定的通透性，PCR擴增所需的各種成分可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)或核內(nèi)，在原位對特定的DNA或RNA進(jìn)行擴增。擴增產(chǎn)物由于分子量較大或互相交織，不易透過細(xì)胞膜向外彌散，固保留在原位。這樣就很容易應(yīng)用ISH將其檢出，同時還可對目的DNA序列的組織細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。與其他PCR方法不同的是，原位PCR不必從組織細(xì)胞中分離模板DNA或RNA。如冷凍的組織或經(jīng)有機試劑固定的組織細(xì)胞，用蛋白酶、DNA酶處理，進(jìn)行原位逆轉(zhuǎn)錄，再加入PCR擴增試劑，即可進(jìn)行原位PCR反應(yīng)。