摘要：對試驗小鼠飼喂1‰和3‰抗菌肽飼料添加劑，雞紅細胞吞噬實驗檢測小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能，研究抗菌肽飼料添加劑對小鼠免疫功能的影響。結果：抗菌肽飼料添加劑可以顯著提高小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬率和吞噬指數，增強小鼠非特異性免疫功能。 關鍵詞：抗菌肽飼料添加劑;先天性免疫;小鼠 Influence of antimicrobial peptides feed additive on the phagocytic function of macrophage in mice WANG Kai1, LUO Jiedong 1, ZHOU Hongbo2,PI Canhui2,PENG Yonghe2,SU Xiangdong2,LI Yongxin2 (1. Foshan University, foshan, 528000, china; 2. Shenzhen Sunsmile Biotechnology Co., Ltd，Shenzhen，518057，China) Abstract:To evaluate the immune function of microbial peptides feed additive, the tests of innate immune function were carried out. Results: After taking the antimicrobiol peptides feed additive, the phagocytic rate and phagocytic index of chicken red cell devoured by mouse abdominal phagocyte were heightened(P<0.01).Conclusion: antimicrobial peptides feed additive can greatly strengthen the phagocytic function of macrophage in mice , and potent improve the host innate immunity. Key words: microbial peptides feed additive ;innate immunity; mouse 抗菌肽是生物在長期進化過程中為適應環境、求得生存而最早產生的免疫活性分子，是天然免疫的重要介質，在宿主對抗病原入侵的免疫防御中起著極其重要的作用，被形象地稱為“天然抗菌劑”，也稱“陽離子宿主防御肽”[1]。抗菌肽在體內除了能以直接殺死病原菌的方式起作用外，更多的時候是作為免疫效應分子來啟動、調節宿主免疫防御體系：如充當單核細胞和T淋巴細胞的趨化因子，使它們能快速聚集在炎癥反應部位;促進化學因子的表達和T輔助淋巴細胞的增殖反應;抑制細菌產物(如脂多糖、脂壁酸)誘導產生對宿主有害的細胞因子，避免內毒素血癥的發生;促使巨噬細胞及激活的淋巴細胞的凋亡，也就是指具有潛在消滅感染細胞的功能等[2]。 本研究旨在通過研究抗菌肽飼料添加劑對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響以探索其對動物非特異性免疫功能的影響，為今后進一步推廣使用抗菌肽，取代傳統抗生素產品提供理論依據。 1材料和方法 1.1 試驗材料 抗菌肽飼料添加劑由深圳圣西馬生物技術有限公司提供，商品名稱為肽輕松。 1.2試驗動物分組 6～8周齡健康小鼠60只，雌雄兼用，體重18～22g，隨機分為三組，每組20只(一組對照，兩個實驗組)分籠飼養，自由飲水和進食。對照組飼喂全價營養飼料，實驗組1飼喂全價營養飼料+1%抗菌肽飼料添加劑;實驗組2飼喂全價營養飼料+3%抗菌肽飼料添加劑。 1.3非特異性免疫功能檢測：小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞功能試驗(半體內法) 飼喂第20天，每只小白鼠腹腔注射加熱至澄清的6%淀粉溶液1ml。24小時后，再次注射1ml淀粉溶液。間隔2h，每鼠腹腔注射1%的雞紅細胞懸液1ml。間隔2h，頸椎脫臼處死，仰位固定于平板上。剖開腹腔，抽取腹腔液滴片，制作臨時裝片，瑞氏染液染色。油鏡下計數100個巨噬細胞中吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數和吞噬的雞紅細胞總數，計算吞噬百分率和吞噬指數[3]。 吞噬百分率(%)=100個巨噬細胞中吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數/100個巨噬細胞×100%; 吞噬指數=100個巨噬細胞中吞噬的雞紅細胞總數/100個巨噬細胞。 1.4 統計方法 采用單因素方差分析，SPSS 11.5 軟件進行統計。 2.試驗結果 抗菌肽對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能的影響，統計結果見表1。由表1中可見，兩個劑量組與對照組比較，小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數均有增高，且差異極顯著(P<0.01)。兩個劑量組相比較，隨著飼喂劑量的提高，小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數都相應提高。 表1抗菌肽對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響 effects of Antimicrobial peptides feed additive on phagocytosis of macrophage in mouse
表中數據為平均值±標準差(X±SD);Dates in the table indicated by Mean±SD.* P<0.05，** P<0.01 3.討論 3.1抗菌肽飼料添加劑可提高小鼠巨噬細胞的吞噬能力 巨噬細胞主要參與動物機體的非特異性免疫反應，可以通過吞噬作用殺傷病原微生物和腫瘤細胞，還可釋放一些細胞因子和效應分子來發揮多種生物學作用，是機體產生特異性免疫應答的基礎和機體維持內環境穩定的重要因素。大多數抗原經巨噬細胞處理后，免疫原性會大大增強，從而刺激機體產生良好的免疫應答[4]。通過測定巨噬細胞對雞紅細胞的吞噬率和吞噬指數可以反映其吞噬功能的強弱。本實驗證實抗菌肽飼料添加劑能增強小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬能力，且吞噬能力隨飼喂劑量的增加而提高。因此，抗菌肽飼料添加制劑具有增強小鼠非特異性免疫功能。這與已發表的報道結果一致：溫劉發[5]等在2001通過試驗證實抗菌肽飼料可以減輕斷奶仔豬的腹瀉，皮燦輝[6]等于2008年對母豬飼喂抗菌肽飼料添加劑，通過試劑盒檢測瘟抗體水平，發現飼喂抗菌肽飼料添加劑的母豬其體內豬瘟抗體水平得到了有效的提高。 3.2抗菌肽作為抗生素替代物的市場應用前景 抗菌肽具有高效性(其半數致死濃度平均在幾十微摩爾以內)、抗菌譜廣、可供選擇的范圍廣、靶菌株不易產生抗性突變等，從而避免了傳統抗生素類藥物對機體免疫系統的損害。抗菌肽作為畜禽飼料添加劑取代或部分取代目前飼喂動物所用的抗生素，減少抗生素對動物體的危害，已經顯示出了較好的應用前景： 溫劉發[7]等證實，將開發的抗菌肽飼料添加于斷奶仔豬飼料中，可以減輕斷奶仔豬的腹瀉;陳曉生等人[8]在肉鴨飼料中添加液體的蠶抗菌肽A D-酵母制劑后，發現鴨的血清代謝激素活動和營養物質合成顯著增強;黃永彤等[7]將抗菌肽應用于飼喂肉雞，發現有促進生長和提高免疫力作用，且與中草藥和抗生素組對比，均無顯著性差異;王廣軍等[9]在南美白對蝦養殖中研究抗菌肽的應用效果，證實在飼料中添加抗菌肽后在日生長速度、相對增重率、飼料系數、成活率和抗病力方面均有顯著提高。 隨著抗菌肽應用領域的不斷拓展及其作用機理研究的不斷深入發展，抗菌肽與人類生活的關系也將越來越密切，抗菌肽的市場開發和應用前景必將更為廣闊。 （作者：圣西馬 來源：圣西馬） |
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