檢測益生素的幾種辦法

中ke小飯

益生菌不僅有很多種類（如芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌），其檢測方法也是非常之多。對不同的益生素，需要選擇適當的方法來檢測、計數。

目前常用的檢測是顯微鏡直接計數法和平板計數法兩種，顯微鏡直接計數法的最大優點就是快速，而且此方法可以通用，即不同的益生菌種類都可以用同一方法檢測其數量；但其也有諸多缺點，如不能區分死菌和活菌，也不能區分形狀類似的不同益生菌，故其只能作為一種粗略、簡單的方法。而平板計數法卻可以克服顯微鏡計數法的缺點，但其對操作人員素質及操作能力要求都比較高，需要比較專業人員來操作。
針對目前選擇以平板計數來進行測量益生菌的含量為主，本文也就此方法作一簡單探討。
計數培養的稀釋度選擇
根據產品說明選擇適宜的稀釋度。
采用玻片直接涂布法，即在潔凈的玻片上劃1cm2正方形，然后吸取經5～10倍稀釋的檢樣0.01mL涂布在方框內，干燥固定后，先用甲醇處理5min再進行革蘭氏染色、鏡檢，判斷大概菌數和菌種，則可預測分離培養應選擇的培養基和稀釋倍數，如不能判斷，即認為每克樣品含菌數小于105。
培養基的選擇
根據涂布的預測與產品說明，選擇相應的培養基。
檢測的操作
稀釋：
準確稱取益生素樣品10g，放入裝有90mL無菌水的玻璃瓶中，用手或振蕩機振蕩20min，靜置約20min，即成10-1稀釋液；再用10mL無菌吸管，吸取10-1菌液10mL移入裝有90mL無菌水的玻璃瓶中，充分震蕩，即成10-2稀釋液；以此類推，每次更換吸管連續稀釋，直到制成適當稀釋度的菌懸液。
平板接種：
用1mL無菌吸管吸取適當稀釋度的菌懸液1mL到一個滅菌平皿中，接種好三個平皿，再在培養皿中分別倒入已融化并冷卻至45-50℃左右的培養基，蓋好蓋子，趁熱輕輕轉動培養皿，使菌液與培養基混合均勻，冷凝后倒置37℃下培養48～72h后長出菌落后即可計數。
結果計算及說明：
將三個平皿的平均菌落數乘以稀釋倍數，即為每g益生素中所含的活菌數（如在10-8有30個菌落，即可計為3.0×109cfu/g或者cfu/mL）。選取菌落數在30-300之間的平皿作為菌落總數測定的標準。
討論
益生素菌種的質量是微生態調節劑生產的關鍵和質量保證，因此在生產前必須作如下鑒定：
(1)菌株染色形態與菌落均應具典型特征；
(2)生化反應與糖發酵均應符合伯杰氏細菌分類的特征；
(3)對于乳酸菌類須測定其代謝產物中的有機酸；
(4)血清學檢查、凝聚試驗，效價不低于原效價的1/2；
(5)毒性試驗:濃菌液給小白鼠腹腔注射或灌胃試驗，小白鼠應無不良反應出現；
(6)必要時作遺傳學特征的鑒定。